Qhov sib txawv ntawm (ob lub phoson, ua rau pom zoo) fluorescence tsom thiab siv lub tshuab tsom
Tus txheej txheem tseem ceeb ntawm ob-photon exitation yog nyob rau ntawm HighT Phoedength canons thiab emit lub wavelengthed me ntsis tom qab hu ua lub neej zoo siab rau lub neej; Cov nyhuv yog tib yam li siv lub photon nrog ib nrab ntawm nthwv dej ntev ntev rau kev ua kom zoo fluorescent molecules. Ob lub photon extitation yuav tsum tau muaj lub photon ntom ntom ntom, thiab txhawm rau kom tsis txhob muaj kev puas tsuaj, ob-photo motioncopy siv siab-zog hom-cov xauv mem tes-xauv hom-cov xauv mem tes-xauv hom-cov xauv mem tes lasers. Lub laser embes muaj lub zog siab siab thiab muaj lub zog nruab nrab, nrog cov mem tes dav ntawm tsuas yog 100 femtoseconds thiab ntau zaus txog li 80 mus rau 100 megahertz. Thaum siv cov lej siab aperture lub ntsiab lus Lens los tsom lub ntsiab ntawm lub hom phiaj ntawm lub hom phiaj ntawm lub hom phiaj, thiab ob lub photon ntau dua tsuas yog tshwm sim ntawm lub hom phiaj ntawm lub hom phiaj. Yog li no, ob lub tsom iav tsom iav tsis xav tau ib qho kev sib tw pinhole, uas txhim kho cov efficiency nrhiav tau.
Feem ntau cov fluorescence phenomena, vim qhov qes qis ntawm lub teeb pom kev zoo nkauj tuaj yeem nqus tau ib lub photon ib zaug thiab tom qab ntawd kev hloov fluorescent, uas yog lub npe hu ua kev ua fluorescence. Rau fluorescence excitation cov txheej txheem siv lasers ua cov chaw teeb tsa, ob lub photon lossis txawm multiphoton fluorescence phenomena yuav tshwm sim. Hauv qhov no, qhov chaw siab tshaj plaws uas siv tau siv qhov siab thiab cov photon ceev uas ua tau raws li cov kev xav tau rau cov tshuaj tua fluorescent molecules kom nqus ob lub photons ib txhij. Nyob rau hauv cov txheej txheem ntawm kev siv laser dav dav raws li lub teeb lub zog zoo nkauj, lub photon ceev tseem tsis txaus los tsim ob-photon nqus eromenon. Feem ntau, femtosecond mem tes yog siv, nrog instantaneous qib mus txog rau theem megawatt. Yog li ntawd, lub wavelength ntawm ob-photon fluorescence tau luv dua li ntawm lub teeb kom txaus siab, sib npaug rau cov nyhuv ua rau ib nrab kev zam siab ntev heev.
Kev paub txog kev sib cais fluorescence microscopy
Lub ntsiab cai yooj yim ntawm kev ua fluoricescence microscopy yog siv lub teeb pom kev zoo rau cov quav, tsim ib lub teeb pom kev zoo ntawm lub dav hlau. Cov fluorescence tau tawm los ntawm cov chaw no tom qab kev tawm dag zog yog sau los ntawm lub hom phiaj lens thiab xa rov qab raws cov nqaj sib cais ntawm daim iav dichroob. Spectrometer xa cov fluorescence ncaj qha rau cov ntes. Muaj tus pinhole nyob rau hauv pem hauv ntej ntawm lub teeb ci thiab lub ntsuas pom, hu ua lub istination pinhole thiab nrhiav kev pom pinhole, feem. Geometric qhov ntev ntawm ob yog xwm yeem, kwv yees li 100-200 nm; Piv rau cov teeb pom kev ntawm lub dav hlau hauv qab, ob lub ntsiab lus tau pom ob qho tib si ntawm cov duab ci ci thiab nrhiav tau cov pinhole ib txhij. Nyob rau hauv txoj kev no, lub teeb los ntawm lub dav hlau focal tuaj yeem sib sau ua ke hauv thaj tsam ntawm sab saud lossis qis dua lub teeb pom kev sab nraud lossis tsis tuaj yeem xav txog. Kev ntsuas tus qauv taw tes los ntawm taw tes nrog laser, hloov pauv cov duab digital, thiab thaum kawg nws nkag mus rau hauv lub khoos phis tawm hauv lub computer
