Kev paub txog confocal fluorescence microscopy
Lub hauv paus ntsiab lus ntawm confocal fluorescence microscopy yog siv lub teeb taw tes rau irradiate cov qauv, tsim ib qho chaw me me ntawm lub dav hlau focal. Cov fluorescence emitted los ntawm qhov chaw tom qab irradiation yog sau los ntawm lub hom phiaj lens thiab xa rov qab mus rau lub spectrophotometer muaj li ntawm ib tug bidirectional xim daim iav raws li thawj irradiation txoj kev. Lub spectrophotometer xa fluorescence ncaj qha mus rau lub ntes. Muaj ob lub pinholes nyob rau hauv pem hauv ntej ntawm lub teeb qhov chaw thiab ntes, feem hu ua illumination pinholes thiab nrhiav pom pinholes. Qhov ntev geometric ntawm ob qhov sib xws, txog 100-200nm; Piv nrog rau lub teeb taw tes ntawm lub dav hlau focal, ob qho tib si yog conjugate, txhais tau hais tias lub teeb taw tes dhau los ntawm ntau lub lo ntsiab muag thiab tuaj yeem tsom mus rau ob qho tib si lub teeb pom kev zoo thiab qhov pom lub pinhole ib txhij. Nyob rau hauv txoj kev no, lub teeb los ntawm lub dav hlau focal tuaj yeem sib sau ua ke hauv qhov ntau ntawm qhov nrhiav pom, thaum lub teeb tawg los ntawm sab saud lossis hauv qab ntawm lub dav hlau focal raug thaiv sab nraum lub qhov nrhiav pom thiab tsis tuaj yeem pom. Los ntawm kev soj ntsuam tus qauv taw tes los ntawm taw tes nrog lub laser, lub photomultiplier raj tom qab kuaj pom tus pinhole kuj tau txais cov duab sib thooj ntawm lub teeb taw tes taw tes los ntawm taw tes, uas tau hloov mus rau hauv cov teeb liab digital thiab xa mus rau lub computer. Thaum kawg, ib daim duab meej meej ntawm tag nrho cov dav hlau focal yog synthesized ntawm qhov screen.
Txhua daim duab focal dav hlau yog qhov ua tau ib qho kev kho qhov muag hla ntu ntawm cov qauv, uas ib txwm muaj qee qhov tuab, tseem hu ua ntu qhov muag pom. Vim qhov tseeb tias lub teeb siv ntawm lub focal point yog ntau dua li ntawm qhov tsis yog focal point, thiab lub teeb tsis focal dav hlau yog lim tawm los ntawm pinholes, qhov tob ntawm thaj tsam ntawm confocal system yog kwv yees li xoom. Kev soj ntsuam raws Z-axis kev taw qhia tuaj yeem ua tiav kho qhov muag tomography, tsim ob qhov kev kho qhov muag hlais ntawm qhov chaw focal ntawm cov qauv pom. Los ntawm kev sib txuas XY dav hlau (focal dav hlau) luam theej duab nrog Z-axis (optical axis) scanning, ib daim duab peb sab ntawm cov qauv tuaj yeem tau los ntawm kev sib sau ua ke ntawm cov duab ob sab thiab ua tiav nrog cov software tshwj xeeb hauv computer.
Lub pinhole nrhiav pom thiab lub teeb pom kev pinhole ib txwm tsom mus rau tib lub ntsiab lus, yog li cov fluorescence zoo siab sab nraum lub dav hlau tsom tsis tuaj yeem nkag mus rau qhov kev tshawb pom pinhole.
Cov lus qhia yooj yim ntawm txoj hauv kev ua haujlwm ntawm laser confocal microscopy yog tias nws siv lub laser ua lub teeb ci, thiab ntxiv cov khoom siv laser scanning thiab lub conjugate focusing ntaus ntawv raws li ib txwm fluorescence microscopy imaging. Nws yog ib qho system tswj los ntawm lub computer rau digital duab nrhiav thiab ua.
