Ob-photon fluorescence microscopy muaj ntau yam zoo:
1) Ntev wavelengths ntawm lub teeb tsis tshua muaj kev cuam tshuam los ntawm kev tawg dua li luv wavelengths ntawm lub teeb kom nkag mus rau cov qauv;
(2) Fluorescent molecules sab nraum lub dav hlau focal tsis zoo siab yog li ntawd lub teeb excitation ntau tuaj yeem ncav cuag lub dav hlau focal, kom lub teeb pom kev tuaj yeem nkag mus tob rau hauv cov qauv;
3) Ntev wavelengths ntawm ze-infrared teeb tsis muaj tshuaj lom rau cov hlwb dua li luv wavelengths;
4) Thaum siv ob-photon microscope los soj ntsuam tus qauv, photobleaching thiab phototoxicity tsuas yog nyob ntawm lub dav hlau focal. Yog li ntawd, ob-photon microscopes yog qhov tsim nyog tshaj li ib-photon microscopes rau kev soj ntsuam cov qauv tuab, rau kev soj ntsuam cov cell nyob, los yog ua qhov kev sim photobleaching.
Confocal fluorescence microscope paub
Lub hauv paus ntsiab lus ntawm confocal fluorescence microscope: lub teeb pom kev zoo yog siv los irradiate cov qauv, tsim ib qho me me, zoo-txhais taw tes ntawm lub teeb ntawm lub dav hlau focal. Cov fluorescence tawm ntawm qhov taw tes no tom qab irradiation yog sau los ntawm lub hom phiaj lens thiab xa rov qab mus rau lub beamsplitter uas muaj ib tug bi-directional chromatic daim iav raws li thawj irradiation lub teeb txoj kev. Lub beam splitter xa cov fluorescence ncaj qha mus rau lub ntes. Ob qho tib si lub teeb pom kev zoo thiab lub teeb pom kev txhua tus muaj lub pinhole nyob rau hauv pem hauv ntej ntawm lawv, hu ua illumination pinhole thiab nrhiav kom pom pinhole, feem. Ob leeg muaj tib lub geometry, txog 100-200 nm, thiab yog conjugate nrog rau qhov taw tes ntawm lub teeb ntawm lub focal dav hlau, piv txwv li, lub teeb kis los ntawm ib tug series ntawm lo ntsiab muag thiab thaum kawg tuaj yeem tsom rau ob qho tib si illuminating. thiab detector pinholes. Nyob rau hauv txoj kev no, lub teeb los ntawm lub dav hlau focal tuaj yeem sib sau ua ke hauv qhov kev sojntsuam aperture, thaum lub teeb tawg los ntawm sab saud lossis hauv qab ntawm lub dav hlau focal raug thaiv sab nraum qhov kev sojntsuam aperture thiab tsis tuaj yeem ua duab. Lub laser scans tus qauv taw tes los ntawm taw tes, thiab lub photomultiplier raj tom qab kuaj pom tus pinhole kuj tau txais cov duab confocal ntawm cov teeb pom kev sib raug zoo taw tes los ntawm taw tes, uas tau hloov dua siab tshiab rau hauv cov teeb liab digital thiab xa mus rau lub computer, thiab thaum kawg converges rau hauv qhov tseeb. confocal duab ntawm tag nrho cov dav hlau focal ntawm qhov screen.
Txhua daim duab focal dav hlau yog qhov ua tau ib qho kev kho qhov muag hla ntawm cov qauv, thiab qhov no optical cross-section ib txwm muaj qee qhov tuab, tseem hu ua daim ntawv kho qhov muag. Txij li thaum lub teeb siv ntawm lub focal point yog ntau dua qhov uas tsis yog-focal point, thiab lub dav hlau uas tsis yog-focal yog lim tawm los ntawm lub pinhole, qhov tob ntawm thaj tsam ntawm confocal system yog kwv yees li xoom, thiab scanning. raws li Z-axis kev taw qhia ua rau kho qhov muag tomography los ua ib qho ob-dimensional optical hlais ntawm cov qauv kom pom ntawm qhov chaw focal. Ua ke XY dav hlau (focal dav hlau) luam theej duab nrog Z-axis (optical axis) scanning, ib daim duab peb sab ntawm cov qauv tuaj yeem tau los ntawm kev sib sau ua tiav txheej txheej ntawm ob sab duab, uas tau ua tiav los ntawm kev siv computer tshwj xeeb.
Qhov no txhais tau hais tias tus pinhole nrhiav pom thiab lub teeb pom kev pinhole yog ib txwm tsom ntawm tib lub ntsiab lus, yog li cov fluorescence zoo siab sab nraum lub dav hlau focal tsis tuaj yeem nkag mus rau qhov kev tshawb pom pinhole.
Lub hauv paus ntsiab lus ntawm kev ua haujlwm ntawm laser confocal yog tsuas yog qhia tias nws siv laser ua lub teeb ci, raws li kev siv tshuaj fluorescence microscope imaging, ntxiv laser scanning ntaus ntawv thiab conjugate focusing ntaus ntawv, los ntawm lub computer tswj mus nqa tawm cov duab tau txais thiab ua system.
