Cov Ntsiab Cai ntawm Laser Confocal Microscopy (LSCM)
Lub laser confocal microscope siv lub illumination pinhole tso rau hauv qab lub teeb qhov chaw thiab ib tug nrhiav pom pinhole muab tso rau pem hauv ntej ntawm lub detector kom ua tiav point illumination thiab point detection. Lub teeb los ntawm lub teeb ci yog tsom rau ntawm qhov taw tes hauv lub dav hlau focal ntawm tus qauv los ntawm lub teeb tawm los ntawm lub teeb pom kev, thiab cov fluorescence tawm los ntawm qhov chaw ntawd yog duab nyob rau hauv qhov pom tus pinhole, thiab txhua lub teeb tawm sab nraud ntawm qhov taw tes yog thaiv los ntawm lub teeb pom kev. nrhiav pinhole. Lub illumination pinhole thiab nrhiav pom pinhole yog conjugate rau lub illuminated los yog kuaj pom taw tes, yog li ntawd lub teeb pom kev zoo yog lub confocal point thiab lub dav hlau qhov twg lub detected point nyob rau hauv lub confocal dav hlau. Lub khoos phis tawj qhia txog qhov ntsuas pom ntawm lub khoos phis tawj screen hauv daim ntawv ntawm cov duab taw tes. Txhawm rau tsim cov duab tiav, lub tshuab scanning hauv txoj kev kho qhov muag scans hla lub dav hlau focal ntawm tus qauv, yog li ua tiav cov duab confocal. Ntev npaum li tus neeg nqa khoom theem nce thiab nqis raws Z-axis, qib tshiab ntawm tus qauv yog txav mus rau lub dav hlau confocal, thiab qib tshiab ntawm tus qauv yog duab ntawm tus saib, raws li Z-axis txuas ntxiv mus. txav mus, ua tiav lub teeb-txiav dluab ntawm ntau theem ntawm cov qauv tau txais.
Cov tshuaj kho qhov muag tsom iav siv lub teeb pom kev hauv thaj chaw, cov duab ntawm txhua qhov taw qhia ntawm cov qauv yuav cuam tshuam los ntawm qhov sib txawv lossis tawg ntawm lub teeb los ntawm cov ntsiab lus nyob sib ze; laser scanning confocal microscope siv lub laser beam los ntawm lub illuminated pinhole los tsim ib tug taw tes lub teeb qhov chaw ntawm lub specimen scanned ntawm txhua lub ntsiab lus ntawm lub sab hauv focal dav hlau, cov specimen nyob rau hauv lub irradiated taw tes, lub imaging ntawm lub nrhiav kom tau pinhole, los ntawm kev tshawb nrhiav pinhole. Tom qab lub point of light multiplication tube (PMT) los yog txias electrocoupled device (cCCD) Tau txais point-by-point lossis line-by-line, ib daim duab fluorescent yog tsim sai heev ntawm lub computer saib screen. Illumination pinhole thiab nrhiav pom tus pinhole txheeb ze rau lub dav hlau focal ntawm lub hom phiaj lens yog conjugate, taw tes rau ntawm lub dav hlau focal tib lub sij hawm tsom rau lub teeb pom kev pinhole thiab emission pinhole, qhov taw tes sab nraum lub dav hlau focal yuav tsis nyob rau hauv kev tshawb pom ntawm lub illumination pinhole. pinhole ntawm daim duab, yog li ntawd cov duab confocal tau txais yog cov qauv ntawm qhov muag qhov hla ntu, kov yeej qhov tsis txaus ntawm cov duab microscope zoo tib yam fuzzy.
Los ntawm cov hauv paus ntsiab lus, laser confocal microscope yog ib lub tshuab kho qhov muag niaj hnub, nws yog lub teeb pom kev zoo tib yam los ntawm cov thev naus laus zis los ua cov kev txhim kho hauv qab no.
1. Siv laser ua lub teeb pom kev zoo vim lub monochromaticity ntawm lub laser yog zoo heev, lub wavelength ntawm lub teeb qhov chaw beam yog tib yam, fundamentally tshem tawm cov chromatic aberration.
2. Kev siv tshuab confocal nyob rau hauv lub dav hlau focal ntawm lub hom phiaj lens muab tso rau hauv nruab nrab nrog ib tug me me qhov nyob rau hauv lub baffle, lub focal dav hlau sab nraum lub stray lub teeb thaiv, tshem tawm lub spherical aberration; thiab ntxiv tshem tawm cov chromatic aberration.
3. Laser confocal microscope siv point scanning technology los decompose tus qauv mus rau hauv ob-dimensional los yog peb-dimensional qhov chaw mus rau suav tsis tau cov ntsiab lus, nrog ib tug heev me me laser beam (taw tes lub teeb qhov chaw) taw tes los ntawm taw tes, kab los ntawm kab scanning imaging, thiab ces mus txog. microcomputer ua ke ntawm tag nrho cov dav hlau lossis duab peb-dimensional. Lub teeb pom kev zoo ib txwm muaj yog lub teeb pom kev zoo nyob rau hauv ib qho kev ntsuas ib zaug, cov qauv ntawm txhua qhov taw qhia ntawm daim duab yuav nyob ib sab ntawm lub teeb pom kev sib txawv thiab cov teeb ci tawg. Lub clarity thiab precision ntawm ob daim duab no tsis tuaj yeem muab piv rau.
4. Tau txais thiab ua cov teeb liab kho qhov muag nrog lub khoos phis tawj thiab kev nthuav dav ntawm cov teeb liab nrog lub raj photomultiplier
Nyob rau hauv lub laser confocal microscope, lub computer hloov cov tib neeg lub qhov muag los yog lub koob yees duab rau kev soj ntsuam thiab video kaw, thiab cov dluab uas tau txais yog digitized thiab muaj peev xwm ua tiav nyob rau hauv lub computer los txhim kho lub clarity ntawm cov duab dua. Tsis tas li ntawd, kev siv cov raj photomultiplier tuaj yeem nthuav tawm cov cim tsis muaj zog, txhim kho qhov rhiab heev. Raws li kev sib xyaw ua ke ntawm cov thev naus laus zis saum toj no, nws tuaj yeem hais tau tias LSCM yog lub tshuab ntsuas siab tshaj plaws hauv ntiaj teb. Nws tuaj yeem hais tias LSCM yog kev sib xyaw ua ke ntawm cov tshuab siv tshuab hluav taws xob ntau lawm, photoelectric technology, computer technology **, yog cov khoom lag luam inevitable ntawm kev txhim kho cov cuab yeej niaj hnub no.
