Laser Confocal Microscopy - Nta thiab daim ntawv thov
Laser scanning confocal microscopy (LSCM) yog ib hom kev tsom xam uas tsim los ntawm kev siv tshuab ua kom pom tseeb, uas yog, lub teeb pom kev laser, cov qauv yuav tsum ntsuas, thiab lub ntsuas ntsuas yog tag nrho hauv cov haujlwm sib txuas.
Tseem ceeb
Nyob rau hauv ib lub tshuab microscope, cov duab dav hlau ntawm kev soj ntsuam yog cais tawm ntawm lub dav hlau axial uas nyob ib sab los ntawm coinciding lub focal dav hlau ntawm lub hom phiaj lens nrog lub ntes, thaum nyob rau hauv ib tug confocal microscope, ib tug diffraction-limited lub teeb qhov chaw yog siv los illuminates tus qauv thiab A. pinhole yog siv nyob rau hauv txoj kev sib sau lub teeb ntawm lub conjugate tsom ntawm lub teeb pom kev los lim lub teeb stray los tsim qhov kev sib cais no thiab yog li txhim kho kev daws teeb meem.
Duab nta
Optical seem scanning duab
Lwm feature ntawm laser scanning confocal microscopy yog hais tias nws yog ib tug scanning imaging technology. Cov cuab yeej siv hluav taws xob dav dav dav pom pom tag nrho cov qauv, yog li cov duab tuaj yeem raug ntes ncaj qha los ntawm qhov muag liab qab lossis lub ntsuas ntsuas, tab sis LSCM siv cov nqaj lossis Ntau cov kab teeb pom kev hla dhau ntawm cov qauv los luam theej duab thiab duab. Cov duab uas tau tshwm sim yog hu ua ntu kho qhov muag. Cov hauv qab no qhia tau hais tias qhov sib txawv ntawm cov txheej txheem dav dav-teeb pom kev zoo thiab laser scanning confocal illumination txoj kev.
Yog li ntawd, txoj kev ua haujlwm tiag tiag ntawm lub tshuab tsom iav niaj hnub no yog raws li qhia hauv daim duab hauv qab no. Lub teeb excitation emitted los ntawm lub laser dhau los ntawm ib daim iav dichroic thiab scanned nyob rau hauv x thiab y kev taw qhia ntawm tus qauv los ntawm ib tug khub ntawm galvanometers. Lub excitation (los yog xav txog) ntawm tus qauv yog Lub teeb nkag mus rau lub PMT detector los ntawm lub pinhole thiab kaw, thiab cov ntaub ntawv scanned duab yog reconstructed los ntawm ib lub computer los reconstruct tus qauv duab.
Tsim "z-stack" cov duab ntawm cov dav hlau focal sib txawv
Tsuas yog lub teeb pom kev rov qab los ntawm cov qauv txheej txheem sib txuas tuaj yeem dhau los ntawm qhov me me hauv txoj kev sib sau lub teeb, thiab cov seem tsis cuam tshuam cov qauv txheej cuam tshuam yog thaiv los ntawm lub qhov me me. Qhov no tuaj yeem ua rau muaj kev daws teeb meem tseem ceeb. Kev sib piv ib sab ntawm ntau qhov fluorescence microscopy thiab confocal microscopy ntawm tib cov qauv tuab. Thaum cov dluab raug coj los ntawm ntau lub dav hlau focal, cov duab uas feem ntau hu ua "z-stacks" tuaj yeem tsim tau, uas qhia txog qhov kev daws teeb meem thiab qhov sib txawv tau txais los ntawm confocal microscopy thiab cov hauv paus ntsiab lus ntawm cov txiaj ntsig no. Nws tuaj yeem pom tau tias kev tshuaj xyuas cov duab nyob rau sab saum toj ntawm pawg nrog cov duab dav hlau saum toj no cov ntaub so ntswg nthuav tawm ntau lub teeb tawg nyob rau hauv cov duab fluorescence, whereas lub confocal microscopy duab tshwm dub. Qhov kev txo qis hauv axial PSF ncaj qha ua rau qhov kev daws teeb meem sib txawv pom ntawm optical interface hauv nruab nrab ntawm z-pawg.
Kev daws teeb meem zoo dua qub piv rau cov teeb pom kev dav dav
Hauv fluorescence microscopy, lub teeb siv hluav taws xob tawm los ntawm ib qho taw qhia tau piav qhia los ntawm qhov taw qhia kis tau zoo (PSF), thiab nws cov qauv yog Airy disk. Qhov kev daws teeb meem ntawm fluorescence system tuaj yeem piav qhia los ntawm lub vojvoog ntawm Airy disk, uas tuaj yeem piav qhia los ntawm Tus lej aperture ntawm lub hom phiaj lens thiab lub wavelength ntawm lub teeb excitation txiav txim siab.
