Txhim kho cov txiaj ntsig ntawm laser scanning multiphoton microscopy
Laser scanning multiphoton microscopy yog ib qho kev txhim kho loj tshaj optical microscopy. Nws tuaj yeem soj ntsuam cov qauv sib sib zog nqus ntawm cov hlwb nyob, cov hlwb ruaj khov thiab cov ntaub so ntswg, thiab tuaj yeem tau txais cov txheej txheem ntau txheej Z-dav hlau, uas yog, qhov chaw kho qhov muag, los ntawm qhov uas nws tuaj yeem tsim cov qauv peb-dimensional ntawm cov qauv. Confocal microscopy siv lub teeb pom kev laser uas, tom qab nthuav dav, ua rau tag nrho rov qab lub dav hlau focal ntawm lub hom phiaj lens, thiab tom qab ntawd dhau los ntawm lub lens system ntawm lub hom phiaj lens kom converge rau hauv ib qho me me ntawm lub dav hlau focal ntawm cov qauv. Nyob ntawm tus lej aperture ntawm lub hom phiaj lens, txoj kab uas hla ntawm lub teeb pom kev zoo tshaj plaws yog li 0.25 ~ 0.8μm, thiab qhov tob yog li ntawm 0.5 ~ 1.5μm . Qhov luaj li cas ntawm qhov chaw confocal nyob ntawm lub tshuab ntsuas qhov tsim, laser wavelength, lub hom phiaj lens yam ntxwv, scanning unit raws li txoj cai thiab cov khoom kuaj. Field microscopy muaj qhov teeb pom kev loj loj thiab qhov tob, qhov chaw ntawm lub ntsej muag microscopy muaj lub teeb pom kev zoo tsom rau ntawm qhov chaw focal ntawm lub dav hlau focal. Qhov zoo tshaj plaws ntawm confocal microscopy yog tias nws tuaj yeem ua tau zoo kho qhov muag ntawm cov qauv fluorescent tuab (uas tuaj yeem ncav cuag 50 μm lossis ntau dua), thiab cov thickness ntawm cov seem yog li 0.5 txog 1.5 μm. Cov duab ntawm cov duab kho qhov muag tuaj yeem tau txais los ntawm kev txav cov qauv nce thiab nqis siv lub tshuab tsom iav Z-axis stepper lub cev muaj zog. Kev nrhiav tau ntawm cov ntaub ntawv duab yog tswj nyob rau hauv lub dav hlau thiab yuav tsis cuam tshuam los ntawm cov teeb liab tawm ntawm lwm qhov chaw ntawm cov qauv. Tom qab tshem tawm cov kev cuam tshuam ntawm keeb kwm yav dhau los fluorescence thiab ua rau cov teeb liab-rau-suab nrov piv, qhov sib piv thiab kev daws teeb meem ntawm cov duab confocal tau zoo dua qub dua piv rau cov duab luminated fluorescence. Hauv ntau cov qauv, ntau cov khoom sib txawv ntawm cov qauv sib txuas ua ke los tsim cov txheej txheem nyuaj, tab sis ib zaug txaus cov khoom kho qhov muag tuaj yeem sau tau, peb tuaj yeem tsim kho lawv hauv peb qhov ntev los ntawm software. Txoj kev sim no tau siv dav hauv kev tshawb fawb lom neeg los qhia txog cov txheej txheem nyuaj thiab kev sib raug zoo ntawm cov hlwb lossis cov ntaub so ntswg.
